PCR實驗室風淋室與凈化設備要求
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實驗室凈化設備,比如臭氧、紫外線燈、風淋室(包括貨淋室)、傳遞窗、超凈工作臺、FFU、高效送風口、互聯鎖等凈化輔助設備??諝膺^濾系統,有初效過濾器、中效過濾器、高效過濾器等。
PCR實驗室有哪些凈化要求?
分類:實驗室家具
一、PCR實驗(experiment)室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能(maybe)性,宜采用全送全排的氣流組織形式。實驗室凈化由于潔凈實驗室-生物安全實驗室內操作對象是危險性的微生物,對人體、動植物或環境具有危害,必須通過采用合理的空氣調節系統,保持潔凈實驗室-生物安全實驗室的相對負壓環境無論何時都不被破壞,以保證實驗室內危險性微生物不能向外部環境中擴散。同時,要嚴格控制(control)送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。
2.1試劑貯存和準備區
二、實驗(experiment)區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原料(raw material)必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。 對與氣流壓力的控制(control),本區并沒有嚴格的要求。
標本制備區
試劑貯存和準備區
標本制備區
擴增反應混合物配制和擴增區
緩沖區
傳遞窗
擴增反應混合物配制和擴增區
三、本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
四、該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。凈化實驗室必須控制實驗室的潔凈度,對新風進行過濾,使實驗室達到一定的凈化要求。其中排風系統是重點,對于保證實驗室相對負壓環境和有效過濾室內污染排風起著重要的作用。
PCR實驗室設計建設中容易出現的問題(實驗室家具):
1、PCR實驗室的空氣流向必須嚴格按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區空氣壓力逐漸遞減方式進行,防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區域。需要嚴格的通風設計,若通風設計不合理,會使風速流向混亂,甚至危害人們健康。
2、人流路徑與物流路徑設計不合理:
進入實驗室區域工作人員應該按照以下路徑:公共清潔區——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——風淋室——污染實驗區。
工作人員退出實驗室的路徑為:污染試驗區——緩沖間——風淋室(有條件的可設置)——更衣間——公共清潔區
PCR實驗室污染方式及處理(實驗室家具)
分類: 實驗室家具
有實驗室的地方,就不可避免的會出現實驗室污染。實驗室的污染,不僅會影響實驗與科研的質量和效果,還對實驗室工作人員的身體健康有損害,PCR實驗室的污染原因及解決方法。
PCR實驗室污染
標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染,或標本放置時,由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中,由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導致彼此間的污染。
PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
PCR擴增產物污染:這是PCR反應中最主要最常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限,所以極微量的PCR產物污染,就可造成假陽就可形成假陽性。
還有一種容易忽視,最可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染;在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠,在操作時比較劇烈地搖動反應管,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。
實驗室中克隆質粒的污染:在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室,這個問題也比較常見,因為克隆質粒在單位容積內含量相當高,另外在純化過程中需用較多的用具及試劑,而且在活細胞內的質粒,由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力,其污染可能性也很大。
PCR實驗室設計方案
分類: 實驗室裝修
1、主體結構:
主體為彩鋼板、鋁(Al)合金(熔點660)型材。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金
50內圓角鋁(Al),從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結構牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
2、標準的四區分隔和氣壓調節:
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增,產物分析(Analyse)四個獨立的實驗(experiment)區。凈化實驗室控制系統是整個潔凈實驗室安全運行的神經中樞,由于潔凈實驗室-生物安全實驗室的實驗對象是危險性的微生物,出于嚴格控制污染的原則,它要求以最少的維護人員,運用最優化的管理維護手段,來實時監控每一個實驗室中設備所處的物理環境,保證實驗室運行過程中始終處于相對負壓環境,防止危險性微生物外泄。整個區域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區設置有緩沖區,同時各區通過氣壓調節,使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低(reduce)擴增產物對人員和環境的污染。
可打開緩沖區,緩沖區和 PCR 擴增區的排風扇往外排氣,在實驗(experiment)區的外墻上和各扇門上都安裝有風量(定義:單位時間內空氣的流通量)可調的回風口,空氣通過回風口向室內換氣。
3、消毒:
在三個實驗(experiment)區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。潔凈實驗室無菌試驗室、生物安全實驗室必須保證人身安全、環境安全、廢棄物安全和樣本安全,能長期而安全地運行,同時還為需要實驗室工作人員提供一個舒適、而良好的工作環境。
在試劑準備區和標本制備區還設置移動紫外線(Ultraviolet rays)燈,對實驗(experiment)桌進行局部(part)消毒。
4、不銹鋼(不銹耐酸鋼)傳遞(transmission)窗:
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
5、地面
地面建議使用聚氯乙烯(Polyvinyl chloride)卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕(釋義:指腐爛、消失、侵蝕等)。